苜蓿中酶制劑的開發(fā)

2021-06-03

傳統(tǒng)上,絕大多數(shù)工業(yè)酶制劑的生產(chǎn)是通過特殊微生物的大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng),經(jīng)收集、提取、加工和純化而成的。這需要復(fù)雜昂貴的設(shè)備投資及工藝操作,因而生產(chǎn)成本較高。近十年來,隨著以基因工程為核心的生物技術(shù)的迅猛發(fā)展,科學(xué)家們通過應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù),將轉(zhuǎn)基因苜蓿作為一種生物反應(yīng)器,用來生產(chǎn)特殊的工業(yè)酶制劑,開辟了苜蓿開發(fā)利用的一個(gè)新領(lǐng)域,展示出其潛在的商業(yè)價(jià)值。

苜蓿作為生物反應(yīng)器作物,具有其一定的優(yōu)勢(shì)。主要表現(xiàn)在:種植面積大(曾是種植面積排列第四位的作物,其種植面積約1.6億畝?,F(xiàn)在我國(guó)的種植面積也已達(dá)2000多萬(wàn)畝)、多年生的習(xí)性可使其一次播種連續(xù)多年利用、再生性好、產(chǎn)量高、每年收割三茬以上、耕種管理?xiàng)l件要求較低、使用肥料和農(nóng)藥較少、生產(chǎn)成本低、固氮特性利于培肥封、保護(hù)環(huán)境等;同時(shí)作為轉(zhuǎn)基因的受體植物,在其基因的轉(zhuǎn)化和組織培養(yǎng)再生植株等技術(shù)方面均已建立了較好的研究基礎(chǔ)。

由于工業(yè)、環(huán)保等領(lǐng)域快速發(fā)展,工業(yè)酶制劑的需求量正在劇增。如應(yīng)用于生物制漿、食品加工、碳水化合物及化學(xué)品的合成轉(zhuǎn)化、人和動(dòng)物的食品添加劑、環(huán)境中有毒或污染物的降解去毒等。當(dāng)前在工業(yè)上常用的酶類中,約有20種可以做到比較便宜地大規(guī)模生產(chǎn)。但有些酶的生產(chǎn)成本是非常高昂的。美國(guó)wisconsin大學(xué)的研究人員正在研究使用從微生物中克隆目的基因轉(zhuǎn)化苜蓿,然后從轉(zhuǎn)基因苜蓿中提取純化目標(biāo)酶,從而大大地降低了一些特殊酶的生產(chǎn)成本。

目前研究較為成功的例子有如下兩種酶:第一是mn依賴型的木質(zhì)素過氧化物酶(mn-p)。其編碼基因是從一種叫phanerochaetechrysosporium的微生物基因組中克隆的。它實(shí)際上是一種真菌木質(zhì)素降解酶。在工業(yè)上可用于生物制漿和生物漂白。它的表達(dá)還可對(duì)苜蓿中木質(zhì)素含量產(chǎn)生影響,因而對(duì)提高反芻動(dòng)物的消化率具有意義。同時(shí)該基因的表達(dá)對(duì)苜蓿的生長(zhǎng)發(fā)育有不利影響。主要是引起葉片發(fā)黃、植株變矮和產(chǎn)量下降??赡苁怯捎趍n-p酶活性,需要將mn2十轉(zhuǎn)化成mn3十,使葉片中缺乏mn2十或是mn3十的積累效應(yīng)危害所致。

將所構(gòu)建的外源基因載體上的組成型啟動(dòng)子替換成誘導(dǎo)型的啟動(dòng)子,解決了這一矛盾。利用誘導(dǎo)型啟動(dòng)子,平時(shí)關(guān)閉該基因,在苜蓿收獲前數(shù)天噴施特殊的化學(xué)藥品,誘導(dǎo)該基因的高效表達(dá),就避免了其對(duì)苜蓿生長(zhǎng)發(fā)育的不利影響。又可高效提取該基因表達(dá)的特異蛋白質(zhì)。

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